高效液相色譜是目前應用最多的色譜分析方法，高效液相色譜系統由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調整。

　　1.高效液相色譜儀系統

　　液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數據處理系統組成。對于整個系統而言，柱子、泵和檢測器是核心部件同時也是易出問題的主要部位。

　　2.常見問題及解決方法

　　高效液相作為一種高精密儀器，如果在使用過程中不按照正確操作的話，就容易導致一些問題。其中最常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰型異常問題。

　　2.1柱壓問題

　　柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩定并不是指壓力值穩定于一個恒定值而是指壓力波動范圍在50PSI(3.3Bar)之間(在使用梯度洗脫時，柱壓平穩緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。

　　2.1.1壓力過高

　　這是高效液相在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的原因。此時，我們應該分段進行檢查。

　　(1).首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡半個小時，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，在檢查;

　　(2).打開Purge閥，使流動相不經過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾白頭堵塞。處理方法：將過濾白頭取出，用10%的異丙醇超聲半個小時。如果壓力降至100PSI(6.7Bar)以下，過濾白頭正常，在檢查;

　　(3).把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常。如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不甚，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。

　　2.1.1壓力過低

　　壓力過低的現象一般是由于系統泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當然還有一個原因就是泵里進了空氣，但此時表現的往往是壓力不穩，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸上液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　高效液相色譜儀日常保養及維護：

　　1、流動相的抽濾要求

　　色譜純試劑，二次蒸餾水，緩沖鹽一定要過濾。

　　2、吸濾頭

　　特殊情況下可拆下濾頭抽取以判斷其中是否堵塞;亦可用注射器吸取流動相通過吸濾頭打出以判斷其是否堵塞。若有堵塞情況可用異丙醇超聲波清洗;清洗不成功則需要更換。

　　3、單向閥

　　如遇到泵壓不穩或流動相不能抽取，則可能是單向閥出現問題，卸下用異丙醇超聲波清洗，清洗時須按其安裝的反相放置在小燒杯中，切記不可與安裝方向倒置超洗!

　　4、泵頭

　　泵頭漏液或出現其它故障一般要申請維修(如漏液，或更換柱塞桿及其密封墊等)。

　　5、過濾片

　　當色譜峰出現異常情況時，有可能是此部件被污染，拆下用異丙醇超洗或更換過濾墊片。

　　6、排液閥

　　此處不能完全密封或漏液時一般是其中的墊片污染或磨損，可卸下后取出其墊片用異丙醇超聲波清洗或更換墊圈。

　　7、手動進樣器

　　平時應注意用二次蒸餾水和甲醇在裝載狀態及進樣分析狀態清洗;如出現漏液現象，原因極可能為轉子密封墊磨損或污染，一般須申請維修或更換配件。

　　8、流通池

　　在色譜峰不正常時可能是此部件被污染可拆卸后取出其中的墊片用異丙醇超洗(可根據說明書進行操作或申請維修)。

　　9、工作站

　　出現死機可重啟計算機;不正常運行時，首先可更換電腦測試其硬件故障;或在本機上重新插撥接口、重新安裝軟件。