暗視野顯微鏡又叫暗場顯微鏡，是一種通過觀察樣品受側向光照射時所產生的散射光來分辨樣品細節的特殊顯微鏡。

　　1、暗視野顯微鏡的原理和結構特點

　　暗視野顯微鏡和一般的明視野顯微鏡區別在于二者的聚光器不同，暗視野顯微鏡裝有一個中央遮暗的聚光器，使光線不能通過聚光器，而只能從聚光器四周邊及未遮暗的部位斜射到載玻片的標本上。因光線是斜射的，不能進入物鏡，故觀察的視野是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線，因光散射作用而使菌體發出亮光，反射到物鏡內，這樣在顯微鏡中可見到暗視野中明亮的物像。

　　暗視野顯微鏡主要用于檢查未染色標本的形態和運動能力。

　　2、操作方法

　　①使用研究用暗視野顯微鏡，或將普通光學顯微鏡上的聚光器取下，換上暗場聚光器。

　　②不論是使用干燥物鏡還是油浸物鏡，鏡檢時都應在聚光器的上透鏡上加一大滴香柏油。

　　③將制作好的細菌懸滴標本片置于載物臺上，上升聚光器至頂部使油與載玻片接觸。

　　④放大光源 。

　　⑤進行聚光器光軸調節及調焦。用10*物鏡找到被檢物像，關小聚光器虹彩光圈至可在視野中看到視場光闌的輪廓，再上下緩慢調整聚光器，這樣會使視場光闌的像變得清晰，如視場光闌不在場中央，利用聚光器外側 的兩個調節鈕進行調整，當亮光點調到場中央后，再將其開大，即可進行觀察。

　　3、注意事項

　　①暗視野觀察所用物鏡的數值孔徑宜在1.00—1.25左右，太高反而效果不佳，最好是使用帶視場光闌的物鏡，轉動物鏡中部的調節環，可隨意改變數值孔徑的大小。

　　②要求使用的載玻片和蓋玻片必須無劃痕且無灰塵，物鏡前透鏡也必須清潔無塵。載玻片與蓋玻片的厚度應符合標準。載玻片太厚，聚光器的焦點將落在載玻片內，達不到被檢物體的平面上;使用油鏡頭時，由于物鏡的工作距離很短，甚至無法調焦，從而看不到或看不清被檢物體。

　　③鏡檢時室內要暗，如果沒有這樣的條件，應盡可能使用遮光裝置，以阻止目鏡周圍的光線射入。

　　④在進行油鏡鏡檢時，由于油內的雜質和氣泡的漫反射，會妨礙視場的鏡檢效果，所以要求盡可能地除掉油內的雜質和氣泡。