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植物轉基因技術

[2013/7/11]

  (1)農桿菌介導轉化法 將外植體放入含有外源基因的農桿菌(Agrobacteriumtume/ociens)菌液中浸泡,然后轉入共培養基,再轉入篩選培養基誘導抗性愈傷組織和抗性芽,生根后的抗性植株移栽至營養缽生長。

  (2)基因槍法 又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金粒或鎢粒表面,然后在高壓的作用下,微粒被高速射入受體細胞或組織,微粒上的外源DNA進入細胞后,整合到植物染色體上,得以表達,從而實現基因的轉化。

  (3)花粉管通道法 在植物授粉時將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源DNA導入受精卵細胞,并進一步地整合到受體細胞的基因組中,隨著受精卵的發育而成為含轉基因的新個體。該方法于80年代初期由我國學者周光宇提出。我國目前推廣面積最大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的最大優點是不依賴組織培養人工再生植株,技術簡單,不需要裝備精良的實驗室,常規育種工作者易于掌握。

  (4)微注射法 首先制備植物原生質體,游離出細胞,在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下,將目的基因DNA通過微管注射到受體細胞中。

  (5)電穿孔法 在短時間的高壓直流電脈沖的沖擊下,可以使原生質膜的分子疏松,形成暫時性的直徑為3~4nl-n的小孔,但對原生質體生活力影響不大。這時,存在于原生質體周圍溶液中的外源DNA,就可以通過這種小孔進入原生質體,實現基因的直接轉移。

  (6)微束激光打孔法 原生質體在短時間的微束激光照射下,可在質膜表面形成面積約0.25Pm2左右的小孔,使DNA分子進入細胞。

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