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生化與分子生物學(xué)常用緩沖液的配制

[2013/10/8]

  常用緩沖液:

  TE

  pH7.4

  10mmol/LTrisCl(pH7.4)

  1mmol/LEDTA(pH8.0)

  pH7.6

  10mmol/LTrisCl(pH7.6)

  1mmol/LEDTA(pH8.0)

  pH8.0

  10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

  1mmol/LEDTA(pH8.0)

  STE(亦稱TEN)

  0.1mmol/LaCl

  10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

  1mmol/LEDTA(pH8.0)

  STET

  0.1mmol/LaCl

  10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

  1mmol/LEDTA(pH8.0)

  5%TritoX-100

  TNT

  10mmol/LTris?Cl(pH8.0)

  150mmol/LaCl

  0.05%Twee20

  電泳緩沖液

  Tris-乙酸(TAE):50×濃貯存液(每升):242gTri堿

  5 7.1ml冰乙酸

  100ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

  使用時(shí)再稀釋50倍。

  Tris-磷酸(TPE):10×濃貯存液(每升):108gTri堿

  15.5ml85%磷酸(1.679g/ml)

  40ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

  使用時(shí)再稀釋10倍。

  Tris-硼酸(TBE):5×濃貯存液(每升):54gTri堿

  27.5g硼酸20ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

  使用時(shí)再稀釋10倍。

  堿性緩沖液:1×使用液(每升):5ml10mol/LaOH

  2ml0.5mmol/LEDTA(pH8.0)

  Tris-甘氨酸:5×濃貯存液(每升):15.1gTri堿

  94g甘氨酸(電泳級(jí))(pH8.3)

  50ml10%SDS(電泳級(jí))

  2×SD凝膠加樣緩沖液

  100mmol/LTris?HCl(pH6.8)

  200mmol/L二硫蘇糖醇(DTT)

  4%SDS(電泳級(jí))

  0.2%溴酚藍(lán)

  20%甘油

  30%丙烯酰胺:

  將29g丙烯酰胺和1gN,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為60ml的水中,加熱至37℃溶解之,補(bǔ)加

  水至終體積為100ml。用Nalgene濾器(0.45孔徑)過濾除菌查證該溶液的pH值應(yīng)不大于7.0,置棕色瓶中

  保存于室溫。

  10mol/L乙酸銨:

  把770g乙酸銨溶解于800ml水中,加水定容至1L后過濾除菌。

  1mol/LCaCl2:

  在200ml純水中(Milli-Q水或相當(dāng)級(jí)別的水)溶解54gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成10ml小份貯存于-20℃。

  2.5mol/LCaCl2:

  在20ml蒸餾水中溶解13.5gCaCl2?6H2O,用0.22濾器過濾除菌,分裝成1ml小份貯存于-20℃。

  1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):

  用20ml0.01mol/L乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解3.09gDTT,過濾除菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

  0.5mol/LEDTA(pH8.0):

  在800ml水中加入186.1g二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na?H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值至8.0,然后定容至1升,分裝后高壓滅菌備用。

  溴化乙錠(10mg/ml):

  在100ml水中加入1g溴化乙錠,磁力攪拌數(shù)小時(shí)以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉(zhuǎn)移至棕色瓶中,保存于室溫。

  1mol/LMgCl2:

  在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O,用水定容至1升,分裝成小份并高壓滅菌備用。

  酚:氯仿:

  把酚和氯仿等體積混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提幾次以平衡這一混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液層,保存于4℃。

  磷酸緩沖鹽溶液:

  在800ml蒸餾水中溶解8gaCl、0.2gKCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4,用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4,加水定容至1升,高壓蒸汽滅菌20min。保存于室溫。

  乙酸鉀溶液(用于堿裂解):

  在60ml5mol/L乙酸鉀溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水,即成鉀濃度為3mol/L而乙酸根濃度5mol/L的溶液。

  3mol/L乙酸鈉(pH5.2和7.0):

  在800ml水中溶解408.1g三水乙酸鈉,用冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2或用稀乙酸調(diào)節(jié)pH至7.0,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。

  1mol/LTris:

  在800ml水中溶解121.1gTris堿,加入濃HCl調(diào)節(jié)pH至所需值。

  pHHCl

  7.470ml

  7.660ml

  8.042ml

  應(yīng)使溶液冷至室溫后方可最后調(diào)定pH值,加水定容至1升,分裝后高壓滅菌。

  Tri緩沖鹽溶液(T):

  在800ml蒸餾水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris堿,加入0.015酚紅并用HCl調(diào)pH值至7.4,用蒸餾水定容至1升,分裝后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高壓下蒸汽滅菌20分鈡,于室溫保存。

  5mmol/LNH4Ac溶液:

  秤取乙酸銨192.7g,加重蒸水250ml混勻,加重蒸水定容至500ml,1.1kg/cm2滅菌20min。

  10mg/mlA(小牛血清白蛋白)溶液:

  秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml滅菌重蒸水中。置4℃冰箱貯存?zhèn)溆谩?

  10%十二烷基硫酸鈉(SDS):

  在900ml水中溶解100g電泳級(jí)SDS,加熱至68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.2,加入水定容至1L,分裝備用。

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