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各種細胞免疫檢測方法比較

[2014/8/4]

類型 檢測名稱 檢測方法 主要特點
體內(nèi)功能檢驗 遲發(fā)型超敏反應(yīng)法 皮下注射抗原或者負載抗原的DC，觀察紅斑、硬塊的發(fā)生與大小 優(yōu)點：體內(nèi)功能性檢驗，相對比較容易操作；
缺點：只是一種初篩，加陽性與假陰性比較嚴(yán)重。
體外表型檢測 TCR可變區(qū)分析法 使用針對T細胞受體（TCR）可變區(qū)的流式抗體來對表達特定可變區(qū)的T細胞計數(shù) 優(yōu)點：可以提供關(guān)于可變區(qū)使用的群體分布；
缺點：識別同一種抗原的TCR的可變區(qū)可能不相同；單抗不夠豐富，不能檢測所有種類的可變區(qū)。
多肽MHC四聚體法（Tetramer） 用熒光標(biāo)記的MHC-肽四聚體去結(jié)合T細胞，進而做流式分析 優(yōu)點：能做精細分析，靈敏較高；
缺點：只能分析MHC-I類分子，四聚體制備復(fù)雜，成本高昂，需要預(yù)先合成T細胞表位肽。
TCR CDR3序列分析 用PCR的方法擴增T細胞受體互補決定區(qū)3的序列，測序 特點：簡單靈敏，但還不能用于群體分析；
該方法目前剛剛開展，還不能全面評價。
體外功能檢測 細胞因子ELISPOT法 抗原與待測PBMC混合，通過ELISPOT檢測陽性細胞頻率 優(yōu)點：靈敏度最高，單細胞水平，特異性強，結(jié)果直觀可信，成本低，高通量；
缺點：血液PBMC的分離還未實現(xiàn)自動化；還有待于發(fā)展雙因子、多因子ELISPOT技術(shù)。
淋巴細胞增殖試驗（3H胸苷摻入法） 待測PBMC、輻射過的APC、抗原混合孵育，特異性的T細胞增殖，通過摻入的3H胸苷來確定增殖水平 優(yōu)點：是傳統(tǒng)方法，研究比較透徹；
缺點：需要放射性操作，非特異性反應(yīng)比較強，并且靈敏度低。
細胞內(nèi)細胞因子染色法 抗原與待測PBMC混合，把細胞因子保留在細胞內(nèi)，然后用流式抗體染色、計數(shù) 優(yōu)點：單細胞水平，可以同時檢測多個參數(shù)、多種因子；
缺點：操作復(fù)雜，靈敏度相對較低，容易出現(xiàn)假陽性。
細胞因子ELISA法 抗原與待測PBMC混合，然后用定量ELISA法測量細胞受刺激而分泌到上清液中的細胞因子濃度 優(yōu)點：特異性強，可以對細胞因子濃度定量，有以全血作為檢測樣品的潛力；
缺點：只能做群體水平檢測，靈敏度不夠高。
細胞因子mRNA定量法 通過定量RT-PCR方法檢測受刺激的細胞中細胞因子mRNA的水平 優(yōu)點：有利用各種組織樣品的潛力，靈敏度高，高通量；
缺點：容易出現(xiàn)假陽性，只能做群體水平檢測。
CTL殺傷法（51Cr釋放法） 制備51Cr標(biāo)記的表達抗原的靶細胞，與待測PBMC混合，通過51Cr釋放來確定靶細胞被殺傷的水平 優(yōu)點：最直接的功能性檢測；
缺點：靶細胞制備困難，試驗周期長，需要放射性操作，靈敏度低。
極限稀釋計數(shù)CTL法 待測PBMC稀釋到一系列孔中，體外增殖，然后加入靶細胞判定每孔裂解的陰陽性，最后通過泊松統(tǒng)計法確定CTL極限稀釋倍數(shù) 優(yōu)點：對CTL的頻率計數(shù)比直接CTL殺傷法更準(zhǔn)確，靈敏度也有所提高；
缺點：實驗及其復(fù)雜，工作量極大，并且因為有些CTL前體細胞不能增值而導(dǎo)致結(jié)果偏低。
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