一、線性的定義

　　紫外可見分光光度計(jì)的線性是指實(shí)驗(yàn)點(diǎn)接近或偏離比耳定律A=f (C)直線部分的程度。換言之, 如果給定化合物的兩個(gè)濃度的響應(yīng)值之差正比于兩個(gè)被測(cè)試樣的濃度差, 且該差值在誤差要求的范圍內(nèi), 則可認(rèn)為紫外可見分光光度計(jì)的輸出是線性的。

二、線性對(duì)分析測(cè)試誤差的影響

　　紫外可見分光光度計(jì)的線性在定量分析工作中有著極其重要的意義。Johnson、Scott、Munk 等人曾多次指出, 如果儀器的線性很差, 就不可能得到好的定量分析結(jié)果。作者在實(shí)踐中發(fā)現(xiàn), 在給定儀器的情況下( 即儀器的噪聲為“+”值時(shí)) , 當(dāng)被測(cè)試樣的濃度小到一定程度時(shí), 實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏離比耳定律的直線而明顯地向上彎曲, 反之則向下。作者用自制的UV/ FL-1型紫外/ 熒光分光光度計(jì)測(cè)試濃度為4. 06×10 -6 g/ ml 的K2CrO4時(shí), 因儀器“+”噪聲的影響, 產(chǎn)生的吸光度相對(duì)誤差(正偏差) 達(dá)25% , 即真值為0.0052A實(shí)測(cè)為0.0056A。而當(dāng)濃度增大到2.01×10-3 g/ ml 時(shí), 因雜散光的影響, 實(shí)測(cè)K2CrO4的吸光度誤差達(dá)到36% (負(fù)偏差) 。因此, 在定量分析時(shí), 必須嚴(yán)格注意儀器的線性, 否則不能得到好的分析結(jié)果。

三、儀器線性的測(cè)試方法

在正式使用一臺(tái)新的儀器以前, 一般都先對(duì)儀器的線性進(jìn)行測(cè)試。但大多數(shù)使用者只是在某一試樣的某一濃度附近, 用濃度的倍數(shù)變化, 測(cè)出這一段的線性。這只能反映儀器在小范圍內(nèi)的實(shí)用情況, 并不能說明儀器的線性是否符合出廠指標(biāo), 也不能反映儀器的線性范圍。為了全面了解紫外可見分光光度計(jì)的線性, 還需按下述方法進(jìn)行測(cè)試。

測(cè)試紫外可見分光光度計(jì)線性的方法很多, 最常用的大致有以下6 種:

1.溶液稀釋法

溶液稀釋法的具體作法是將鉻酸鉀( K2CrO4 )稀釋到不同濃度, 測(cè)量不同波長(zhǎng)處的吸光度值(一般需測(cè)量85 個(gè)吸光度值) , 然后, 根據(jù)此數(shù)據(jù)作曲線, 再根據(jù)曲線來判斷紫外可見分光光度計(jì)的線性。

2.中性濾光片法

一般以3 塊中性濾光片疊加, 比較測(cè)定值與計(jì)算值之差來判斷紫外可見分光光度計(jì)的線性。

3.百分法

百分法是將被測(cè)試樣的濃度成倍增加, 測(cè)其吸光度, 作曲線, 判斷實(shí)驗(yàn)值偏離比耳定律直線部分的程度。

4.改變樣品池厚度法

用不同厚度的樣品池來測(cè)量鉻酸鉀( K2CrO4 )的吸光度, 以此來判斷紫外可見分光光度計(jì)的線性。

5.旋轉(zhuǎn)扇形板法

以不同透射率的扇形板在樣品光束中旋轉(zhuǎn), 測(cè)出各點(diǎn)透射率與真值進(jìn)行比較; 以此來判斷紫外可見分光光度計(jì)的線性。

6.光疊加法

利用孔規(guī)來分段測(cè)試, 然后作曲線判斷紫外可見分光光度計(jì)的線性。

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