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微量免疫電泳實驗
[2015/9/10]
實驗方法原理:免疫電泳法(immunoelectrophoresis)是把蛋白質電泳分離技術(瓊脂電泳)和免疫學檢測技術(雙向擴散)結合起來的檢測法。此法在微量的基礎上具有分辨率高,靈敏度高,時間短等優點,是很理想的分離和鑒定蛋白質混合物的方法。用于抗原、抗體定性及純度的測定。在臨床診斷方面也有應用價值。
實驗材料:人IgG 兔抗人IgG
試劑、試劑盒:瓊脂,巴比妥鈉,牛血清白蛋白
儀器、耗材:電泳儀,水平電泳槽,打孔器,微量加樣器,牙簽,載玻片,恒溫水浴,小刀
實驗步驟
1.瓊脂板的鋪制:鋪好瓊脂板,打孔劃槽,電泳時不要把槽中的瓊脂挑出來(槽的兩縱向平行邊先不劃開)。
2.加樣:使瓊脂板的上孔里充滿抗原溶液,下孔里充滿著指示蛋白。
3.電泳:同上操作方法,調電流強度為2~4mA/cm。當指示蛋白質到達濾紙的邊緣時就可以停止電泳。一般需要40~60min。
4. 擴散:電泳結束后,從瓊脂板中間的槽里用牙簽挑出瓊脂凝膠,并加入免疫血清。將瓊脂板置溫盒內(或培養皿中),蓋好蓋子放置一夜。次日可以觀察到凝膠內出現的沉淀線。一般情況下每一沉淀線即代表一種抗原成分。根據沉淀的數量、位置可以判斷抗原的純度以及抗原蛋白質的種類。微量免疫電泳常用于分析樣品的血清成分。
5. 觀察:免疫電泳的圖譜可以直接觀察到抗原抗體沉淀線,也可以用0.1%的氨基黑染色后觀察。如果需要保存可以拍照。
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