第一步：輸掖泵的選擇:輸液泵是HPLC系統(tǒng)中最重要的部件之一。

泵的性能好壞直接影響到整個系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可*性。

輸液泵應具備如下性能：

①流量穩(wěn)定，其RSD應<0.5%，這對定性定量的準確性至關重要;

②流量范圍寬，分析型應在0.1~10 ml/min范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào)，制備型應能達100 ml/min;

③輸出壓力高，一般應能達到150~300 kg/cm2;

④液缸容積小;

⑤密封性能好，耐腐蝕。

泵的種類很多，按輸液性質(zhì)可分為恒壓泵和恒流泵。

恒流泵按結(jié)構(gòu)又可分為螺旋注射泵、柱塞往復泵和隔膜往復泵。恒壓泵受柱阻影響，流量不穩(wěn)定;螺旋泵缸體太大，這兩種泵已被淘汰。目前應用最多的是柱塞往復泵。柱塞往復泵的液缸容積小，可至0.1ml，因此易于清洗和更換流動相，特別適合于再循環(huán)和梯度洗脫;改變電機轉(zhuǎn)速能方便地調(diào)節(jié)流量，流量不受柱阻影響;泵壓可達400 kg/cm2。其主要缺點是輸出的脈沖性較大，現(xiàn)多采用雙泵系統(tǒng)來克服。雙泵按連接方式可分為并聯(lián)式和串聯(lián)式，一般說來并聯(lián)泵的流量重現(xiàn)性較好(RSD為 0.1%左右，串聯(lián)泵為0.2~0.3%)，但出故障的機會較多(因多一單向閥)，價格也較貴。

第二步：進樣器的選擇: 早期使用隔膜和停流進樣器，裝在色譜柱入口處。

現(xiàn)在大都使用六通進樣閥或自動進樣器。

進樣裝置要求：密封性好，死體積小，重復性好，保證中心進樣，進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。HPLC進樣方式可分為：隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。

1.隔膜進樣。用微量注射器將樣品注入專門設計的與色譜柱相連的進樣頭內(nèi)，可把樣品直接送到柱頭填充床的中心，死體積幾乎等于零，可以獲得最佳的柱效，且價格便宜，操作方便。但不能在高壓下使用(如10MPa以上);此外隔膜容易吸附樣品產(chǎn)生記憶效應，使進樣重復性只能達到1~2%;加之能耐各種溶劑的橡皮不易找到，常規(guī)分析使用受到限制。

2.停流進樣。可避免在高壓下進樣。但在HPLC中由于隔膜的污染，停泵或重新啟動時往往會出現(xiàn)“鬼峰”;另一缺點是保留時間不準。在以峰的始末信號控制餾分收集的制備色譜中，效果較好。

3.閥進樣。一般HPLC分析常用六通進樣閥(以美國Rheodyne 公司的7725和7725i型最常見)，其關鍵部件由圓形密封墊(轉(zhuǎn)子)和固定底座(定子)組成。由于閥接頭和連接管死體積的存在，柱效率低于隔膜進樣(約下降5~10%左右)，但耐高壓(35~40MPa)，進樣量準確，重復性好(0.5%)，操作方便。

4.自動進樣。用于大量樣品的常規(guī)分析。