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蘇州醫(yī)工所在血液制品細菌污染核酸檢測方面取得進展

[2015/8/28]

  目前,核酸篩檢系統(tǒng)(Nucleic Acids Testing,NAT)已廣泛用于血制品常規(guī)病原體(乙肝、丙肝、艾滋、梅毒)的核酸檢測,極大降低了相關(guān)疾病的輸血傳播。但是,在輸血感染性風險中,血小板的細菌污染及相關(guān)敗血癥性輸血反應仍是棘手的問題。將核酸篩檢技術(shù)用于細菌污染檢測還有不少困難,包括:1、細菌污染不像特定病原體,沒有統(tǒng)一的標準品;2、缺少合適的內(nèi)參質(zhì)控排除假陽性或假陰性結(jié)果;3、核酸擴增聚合酶(Taq)大多是細菌來源,帶有痕量的細菌核酸成分。

  近期,中國科學院蘇州生物醫(yī)學工程技術(shù)研究所血液免疫學研究中心提出一種雙重熒光定量PCR方法可提高細菌污染檢測的可靠性:設計一條人工核酸序列(IRC)作為內(nèi)參,其特點是IRC與靶基因共用同一對引物進行擴增,分別用不同熒光探針進行檢測。通過精確控制IRC分子數(shù)達到陽性檢出限,以其Ct(i)值作為閾值,只有樣本檢測的Ct(s)值小于或等于Ct(i)時,檢測結(jié)果才可認定為陽性。一種雙樣本混合的t測驗(two samples pooled t-test)統(tǒng)計學方法可用于幫助判斷兩個Ct值的大小。IRC還可以包裝成噬菌體,用于監(jiān)控核酸樣本提取過程。 リンク: スープラ スニーカー レディース スニーカー ナイキ エア マックス

  此外,該雙重熒光定量PCR方法可通過分別檢測細菌的DNA(脫氧核糖核酸)與RNA(核糖核酸),計算不同Ct的比值,能判斷細菌是處于生長繁殖期或者已經(jīng)是死菌,從而幫助判斷血制品滅活的效果。該方法不僅能用于血制品細菌污染檢測,理論上也能開發(fā)成其他外源基因核酸定量檢測的有效方法。


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