過濾完鹽酸萬古霉素后，微生物仍可正常生長---賽多利斯實驗室

開展以下試驗是用于證明Sterisart®系統在過濾完鹽酸萬古霉素后，仍可以讓微生物在其中正常生長。

試驗背景

在沒有抑制劑的情況下，微生物可以快速增殖。可能存在于無菌檢測藥品樣品中的任何防腐劑或抗生素殘留物都必須在培養基加入系統之前被沖洗去除。由于萬古霉素不能被中和，所有與樣品接觸的部件必須為低吸附，且所采用的設計形式必須保證能夠實現徹底沖洗從而去

除所有殘留。

試驗描述

Sterisart® 系統經無菌生理鹽水潤濕后，對鹽酸萬古霉素溶液進行過濾。在完成沖洗步驟之后，根據歐洲藥典要求，將胰酪大豆胨液體培養基加入Sterisart® 系統的一個容器內。向這個容器內接種50-100CFU微生物，進行微生物培養，最多培養3天。取出另一個容器中的濾膜，進行抑制試驗。

材料和設備

抗生素鹽酸萬古霉素 

檢測菌株 

枯草芽孢桿菌 

金黃色葡萄球菌 

胰酪大豆胨液體培養基Oxoid;

NaCl

Merck

泵

Sterisart®通用型無菌檢測泵，

Sterisart®通用型無菌檢測泵

Sterisart® 裝置

Sterisart® NF,

Sterisart® NF適配器

檢測準備

v 無菌生理鹽水

為制備0.9%的無菌生理鹽水溶液，先將9g固體NaCl溶解于1L去離子水中，裝入帶有隔膜的瓶中，制備2L。然后對配制完成的溶液進行121°C、40分鐘的高壓蒸汽滅菌。

2

抗生素溶液的溶解(20 g/L)

2.1  背景

抗生素的溶解是無菌檢測操作中非常關鍵的操作步驟。未溶解的殘留抗生素會被膜過濾器截留，導致培養過程中抑制微生物生長。試驗表明使用30°C的生理鹽水溶解鹽酸萬古霉素最為迅速可靠。更為詳細的試驗描述和試驗結果請參考Sterisart® 應用指南No.1。針對下一步驟，我們還專門開發了一種注入和搖勻的方法。生理鹽水的預熱可通過培養箱或水浴輕松實現

2.2  樣品制備

取事先準備好一個帶有隔膜的500ml瓶(瓶A)， 內含10g抗生素混合物。將Sterisart® NF適配器16470的無標識管路插入泵中，然后將16470帶有黃色標記的長針頭插入瓶B的隔膜中，該瓶內裝有500ml已預熱至30°C的無菌生理鹽水；進而將短針頭插入裝有抗生素的瓶A的隔膜中。瓶A以一定角度倒置，使

抗生素凍干粉落到瓶頸處。然后將NaCl溶液以設定值為300的泵速打入裝有抗生素的瓶A中。

大約5秒鐘后，將瓶A恢復正位，讓抗生素和NaCl溶液一起回落到瓶底。流體的泵入壓力要足以將粘在玻璃瓶壁上的抗生素沖洗下來。向瓶A注入溶液到500ml刻度，然后搖動瓶子直至抗生素完全溶解。以上操作步驟使用了貨號為16470的Sterisart®NF適配器和貨號為16413的Sterisart®通用型無菌檢測泵，該泵是現有16420無菌檢測泵的上一代產品。有關Sterisart® NF 適配器16470使用的詳細信息見產品說明書。

試驗方法

1

膜過濾

將Sterisart® 系統16466裝入泵中后，向系統泵入100ml無菌生理鹽水，用于潤濕濾膜。然后向Sterisart® 系統中泵入無菌空氣以排空溶液。隨后，500ml溶解好的抗生素經容器濾過。需特別當心，避免抗生素液體沾到后續無法沖洗到的區域。再次用無菌空氣排空裝置。隨后用5×200ml無菌生理鹽水沖洗濾膜，以確保無抗生素殘留在膜和塑料部件上，從而不會抑制微生物的生長。有關Sterisart®NF裝置的詳細使用信息見所附產品說明書。

2

注入培養基

將100ml大豆酪蛋白消化培養基注入Sterisart® 系統兩個容器中的一個。用夾子將管路夾緊封好，在距夾子約10cm處切斷管路。第二個容器用于進一步檢測。(見 4.5).

3

接種微生物

鹽酸萬古霉素適用于多數革蘭氏陰性細菌。因此試驗使用枯草芽孢桿菌(革蘭氏陰性菌)。通過系列稀釋方式確保每ml枯草芽孢桿菌溶液中含50-100CFU菌。取1.0ml綠膿桿菌溶液加入胰酪大豆胨液體培養基中。

4

培養

Sterisart® 容器在30 °C條件下培養3天。每天檢查微生物的生長情況。

5

膜的抑制試驗

Sterisart® 系統第二個容器中的Sartochem®

膜是用來進行抑制試驗的。打開裝置，移出膜，將膜分成以下3部分：

a: 中央膜片

b: 外部膜片

c: 支撐片

將三個膜組件分別放到接種有金黃色葡萄球菌的瓊脂平皿中，30°C培養24小時。一旦抗生素在膜的特定區域富集，這些區域的細菌生長就會受到抑制。

6

結果

培養24小時后，可觀察到輕微渾濁。培養3天后，Sterisart® 容器內可明顯觀察

到細菌的生長。培養基非常渾濁（生長

情況良好）。抑制試驗表明在膜的不同

區域均未有抗生素殘留。瓊脂平皿上的

微生物直接在膜邊緣生長。它們的生長

未受到抑制。

結論

使用5×200ml生理鹽水沖洗即可確保抗生素的有效去除。微生物生長試驗結果表明測試所用鹽酸萬古霉素在Sterisart®系統內沒有殘留，不存在促進或抑制微生物生長效應。