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核酸提取(RNA提取與DNA提取)

[2015/12/16]

  核酸分為兩大類:一類為核糖核酸(RNA),另一類為脫氧核糖核酸(DNA)。核酸的分子量極大,從數萬到億萬。核酸是兩性化合物,在一定的等電點溶于水,其水溶液呈酸性,不溶于乙醇等有機溶劑。細胞內的核酸常和蛋白質結合成核蛋白。核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白在不同濃度的電解質溶液中的溶解度有顯著區別,在一定濃度范圍的氯化鈉溶液中,脫氧核糖核蛋白的溶解度隨著氯化鈉濃度的增加而逐漸下降,當氯化鈉濃度為0.14mol/L時,其溶解度僅為水中溶解度的1/100,但當氯化鈉濃度在增加時,脫氧核糖核蛋白的溶解度重新增加,氯化鈉濃度增加到0.5mol/L時,其溶解度與水中溶解度相似,當氯化鈉濃度增加到1mol/L時,它的溶解度比在水中大2倍。核糖核蛋白在0.14mol/L氯化鈉溶液中仍有相當大的溶解度,因此常用0.14mol/L氯化鈉溶液提取核糖核蛋白。而提取脫氧核糖核蛋白時,則用1mol/L氯化鈉溶液。兩種核糖核蛋白的溶解度與溶液的pH也有關,當pH值為4.2時,脫氧糖核蛋白的溶解度最低,而pH值為2.0~2.5時,核糖核蛋白的溶解度最低。所以調節氯化鈉溶液的濃度和pH值,可使核糖核蛋白和脫氧核糖核蛋白分離開來。

  RNA的提取通常是用0.14mol/L氯化鈉溶液將組織做均漿并反復提取細胞質中的核糖核蛋白,而留下含有DNA的細胞核物質,然后用10%醋酸調至pH值為4.2時,產生沉淀,離心,棄去上清液,先用0.5mol/L氯化鈉溶液,后用水洗滌沉淀,將核糖核蛋白溶解于0.5mol/L碳酸氫鈉溶液中,離心在取上清液,調節pH值為4.2的沉淀,沉淀用0.5mol/L氯化鈉溶液洗滌,再一次除去脫氧核糖核蛋白。核糖核蛋白中的蛋白質可用含有少量辛醇的氯仿抽提除去,核酸留在碳酸氫鈉水溶液中,加入乙醇,RNA即以鈉鹽形式沉淀出來。

  DNA的提取DNA主要存在于細胞核中,天然狀態的DNA絕大多數是以脫氧核糖核蛋白形式存在的。從人體細胞中提取DNA時,一般先獲得脫氧核糖核蛋白,再將蛋白質除去,從中分離DNA。常用的方法是以1mol/L氯化鈉溶液抽提,得到的脫氧核糖核蛋白溶液與含有少量辛酸或戊酸的氯仿一起振蕩,除去蛋白質;或者在組織細胞破碎后以低濃度0.14mol/L氯化鈉溶液(也可用0.1mol/L氯化鈉加0.05mol/L檸檬酸代替)反復洗滌除去核糖核蛋白,再以1mol/L氯化鈉抽提脫氧核糖核蛋白,提取是用氯仿-戊酸抽提法除去蛋白質。兩種方法比較,后一種方法使核酸降解可能少一些。以稀鹽溶液提取DNA時,加入適量去污劑更有助于蛋白質與DNA的分離。


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